Jeu d'action-aventure en monde ouvert, Assassin's Creed II prend place durant la Renaissance italienne. Le joueur incarne Ezio Auditore da Firenze, jeune noble italien de 17 ans, qui perd sa famille, assassinée sous ses yeux. Obnubilé par sa soif de vengeance, sa quête le ménera sur les traces des Templiers, en passant par de nombreuses villes emblématiques d'Italie dont Venise et Florence.