Le Joker 

Némésis par excellence de Batman, et bien qu'il ait cassé sa pipe lors du grand final d'Arkham City, le Joker n'en a pas pour autant fini de semé le chaos à Gotham. Son sang a en effet été diffusé dans des hôpitaux et on déplore plusieurs cas avérés de sa maladie, qui façonne les victimes à son image.

L’Épouvantail

De retour à Gotham pour semer la peur, Crane dispose d'une toute nouvelle toxine hallucinogène pour mettre son plan à exécution, à savoir : montrer à Batman qu'il est impuissant et qu'il ne peut pas garantir la sécurité des habitants de Gotham. Il s'est en sus adjoint les services d'un chef mercenaire et de tous ses soldats pour s'assurer de ne laisser aucune chance à la chauve-souri.

Chevalier d'Arkham 

Mystérieux chef des mercenaires qui assistent l’Épouvantail, le Chevalier se targue de connaître Batman par cœur, ce qu'il démontrera à de nombreuses reprises... Mais qui peut se cacher sous le masque ?