On commence par caractériser la solution de protéines parmi les 3 solutions inconnues a l’aide du réactif de Bradford:
On verse 400 µL d’eau déminéralisée dans un tube à hémolyse, et 200mL dans 3 autres tubes. On numérote les tubes de 1 à 4. 200 µL de X1 est versé dans le tube 2, 200 µL de X2 dans le tube 3 et 200 µL de X3 dans le tube 4. Rien n’est versé dans le tube 3.
800 µL sont ensuite versés dans chaque tube affin d’avoir un total de 1200 µL. tout les tubes sont ensuite recouverts d’un film de paraffine ; puis on remarque que la solution contenant les 200 µL de X2 est devenue bleue.
Ensuite, on caractérise la solution de glucose parmi les 3 solutions inconnues grâce au réactif glucose RTU:
1 mL de réactif RTU et premièrement versé dans 4 tubes a hémolyse numérotés, puis 0,1 mL d’eau déminéralisée, 0,1 mL de X1, 0,1 mL de X2, 0,1mL de X3 sont respectivement versés dans le tube 1, 2, 3, 4. Les 4 tubes sont ensuite placés dans un bain-marie à 37oC pendant 10 minutes, préalablement recouverts d’un film de paraffine. Apres avoir sortit les tubes, on peut observer que la solution contenant 100 µL de X3 a une couleur rose beaucoup plus vive que les 3 autres solutions.
On fini par caractériser les Acides Nucléiques présent dans une des trois solutions inconnues :
250 µL de X1 (car X2 et X3 ont déjà été caractérisés), 25 µL de NaCl a 2 molaire et 500 µL d’éthanol sont mélangés dans un tube a hémolyse. On remarque que la solution est devenue légèrement trouble.
On procède ensuite au dosage des macromolécules en commençant par les AN :
20 µL de solution X1 et 980 µL d’eau sont versés dans un tube à hémolyse, puis dans une cuve pour spectrophotomètre ; le blanc est fait a l’aide d’eau déminéralisée, puis on prend les valeurs de densité optique (DO) pour 230, 260, 280 et 320 nm.
On dose ensuite la solution de glucide :
1 mL de réactif glucose RTU est versé dans 5 tubes a hémolyse numérotés ; 50, 75 et 100 µL de solution de glucose a 0,2 g/L sont respectivement ajoutés aux tubes 3, 4 et 5 ; 100 µL de la solution glucidique X3 est ajouté au tube 1, de même que 100, 50, 25 µL sont respectivement versés dans les tubes 2, 3 et 4. Les tubes sont placés dans un bain-marie à 37oC pendant 10 minutes, puis les DO des solutions sont lus à 505 nm au spectrophotomètre.
Viens enfin le dosage de la solution de protéines :
800 µL de réactif de Bradford sont d’abord versés dans 8 tubes à hémolyse numérotés ; 200 µL de solution X2 sont ajoutés au tube 1 ; 20, 40, 80, 160 et 200 µL de BSA sont respectivement ajoutés aux tubes 3, 4, 5, 6 et 7 de même que 200, 400, 380, 360, 320, 240, 200 µL d’eau déminéralisée sont respectivement ajoutés aux tubes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 8. On mélange puis lis les DO à 595 nm.
Résultats
Suite au test de caractérisation au test de Bradford, le tube contenant la solution X2 vire au bleu alors que les autres tubes présentent une couleur grisâtre.
A la fin des 10 minutes au bain marie, le tube contenant la solution X3 et le réactif glucose RTU prend une couleur rose vif, alors que les autres tubes ont une couleur rose pale.
Apres avoir effectué le test de caractérisation d’ AN, la solution se trouble légèrement.
On calcule ensuite la concentration d’AN dans le la solution X1 et on trouve 2,115 µL/mL.
fox2236