Une question me turlupine, et la réponse serait la bienvenue, pour un dossier que je dois préparer pour la rentrée.
Lorsque l'on veut faire des mesures d'absorbance, pour une substance donnée, on doit d'abord choisir la longueur d'onde avec laquelle on fera les mesures (ex pour les algues unicellulaire type chlorelles ou euglènes, on prend environ 500 nm il me semble).
Mais comment savoir quelle longueur d'onde choisir ? Cela doit avoir un rapport avec le spectre d'absorption, on remarque pour les chlorelles par exemple qu'il faut prendre la longueur d'onde pour laquelle un minimum d'absorbance est atteint. Mais pourquoi celà ?

Merci d'avcen pour vos réponses providentielles ^^

Personne ne sait ?

N'importe quoi, tu dois prendre la longueur max d'absorbance pour chaque compose.

Et pour cela on trace le spectre en tracant DO=f(longueur d'onde)

Scuse moi, mais tlm dit que pour les chlorelles, il faut prendre une longueur d'onde de 600 ou 650 nm, et si tu regardes le spectre d'absorption de la chlorophylle, c'est bien un minimum d'absorbance qui est atteint pour cette valeur

http://forums.futura-sciences.com/thread34457.html

Merci au revoir

Mais bon tu fais comme tu veux chacun sa merde comme on dit.

Tu t'en calisse de la longueur d'onde, set la a 425 nm et calibre ton spectro avec ta solution tampon et le tour est joué.

Staphyllococcus => Serveur introuvable

bouzi => Moi je veux savoir POURQUOI on choisit telle longueur d'onde plutot que telle autre pour la spectrophotométrie ???

En fait le but c'est de trouver un lambda où le produit à analyser absorbe le plus (lambda max par exemple ...) et où le reste n'absorbe pas ou peu.
Et comme les lambda max sont caractéristiques du produit à analyser, il y a peu de chance que l'on tombe sur le même ... mais bon des fois ça arrive.

On peut travailler avec une autre longueur d'onde tout à fait mais ça dépend de la précision que tu désires.
Pour la précision maximale, tu te mets à la longueur d'onde d'absorption max.

Ton détecteur ne peut différencier 2 absorptions que si elles sont différentes d'une quantité Delta (fonction de l'appareillage). Ce Delta correspond à une différence de concentrations :
Delta = k . (C-C')

Donc pour 2 concentrations C1 et C2
Si (C1 - C2) < (C-C') alors le détecteur ne pourra pas les différencier ... et toi non plus.

Pour un delta donné, plus k est grand, plus (C-C') est faible ... donc, mieux tu arriveras à différencier 2 concentrations et plus ta mesure sera précise.

http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/Photosynthese-cours/image/spectre-action.gif

C'est vrai qu'a 650 nm t'es a une absorbance minimale...

Ici pour les CHLORELLES SEULEMENT on a pris 650nm car cela correspond a longueur d'onde d'absorbance MAXIMALE!!!

Si tu veux savoir quel longueur d'onde prendre la prochaine fois pour doser un acide aminé par exemple, ben prepare une gamme de cuve colorimetrique avec des longueurs d'ondes differentes et croissantes puis mesure leur absorbance respective. Puis tu traces le spectre d'absorption de l'acide aminé à analyser A=f(lambda)

Oki, merci pour toutes tes infos, j'ai mieux compris maintenant.
Je comprends vraiment pas pourquoi on nous a dit de prendre 500nm
Enfin en même temps nos mesures sont plutôt qualitatives que quantitatives (on cherche à observer une évolution de populations de chlorelles), donc une longueur d'onde plutot q'une autre...